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    DAPI染色DNA的原理及DAPI使用方法讲解

    发布时间: 2021-12-22  点击次数: 50次
      DAPI染色DNA的原理及DAPI使用方法:
     
      DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),分子式为C16 H15 N5 ·2C3 H6 O3 ,分子量457.48。DAPI 为一种荧光染料,可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) 。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
     
      DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外,因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm,最大发射波长为488nm;当DAPI与双链DNA结合时,最大吸收波长为364nm,最大发射波长为454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5,其发散光的波长范围约在500nm左右。

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