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    几种常用固定液及优缺点比较

    发布时间: 2022-01-12  点击次数: 36次
      固定液作用是杀死细胞,固定细胞形态。下面列举几种常用固定液及优缺点比较。
     
      1. 冷丙酮 可用于一般的免疫组化染色。
     
      将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮(放心,丙酮在此温度不会为固体的)细胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很强的挥发性,注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严,防止其挥发)固定10分钟。取出后,室温吹干,然后放入-20℃保存。
     
      2. 多聚甲醛(常用4%):可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。
     
      主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等
     
      室温固定15分钟后,将表面液体吹干,入-20℃保存
     
      3. 95%乙醇,可用于免疫组化。
     
      优点:穿透性强、抗原性保存较好。
     
      缺点:但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差,使蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解;染色过程中,温育时间长,抗原可流失而减弱反应强度
     
      室温固定15分钟后,将表面液体吹干,入-20℃保存
     
      4. 甲醛(福尔马林)应用最广
     
      优点:形态结构保存好,且穿透性强,
     
      缺点: 甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色; 分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。

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