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    5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)

    发布时间: 2022-01-18  点击次数: 35次

    5′-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)

    产品货号BA1547

     

    产品规格50T

     

    产品简介

    核酸(nucleic?acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命的基本物质之一,广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,根据化学组成不同,核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)

    5′-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)检测原理是无机磷与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵,随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子,进而形成蓝色的钼蓝,在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比,在660nm处检测吸光度,通过检查标准曲线,获得磷含量。同时为了消除其他无机磷的干扰,测定未经过碘酸氧化的无机磷,予以扣除,即为准确的5′-核苷酸磷。该试剂盒的特点是专一测定5′-核苷酸。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

     

    产品组成:

    产品组成

    50T

    保存条件

    试剂A磷标准(1mg/ml 

    1ml

    4

    试剂B):样品处理液 

    10ml

    4℃,避光

    试剂(C):玻璃珠

    50

    室温,避光

    试剂(D):H2O2

    2×1ml

    室温,避光

    临用前,按E1E2E3=311配制定磷试剂,即配即用。

    试剂(F):过碘酸试剂

    3ml

    4℃,避光

    试剂(G):NA assay buffer

    15ml

    室温,避光

     

    操作步骤(仅供参考)

    1. 稀释标准品:取磷标准(1mg/ml),按磷标准(1mg/ml):蒸馏水=199的比例稀释标准品至10μg/ml。取干净离心管或试管,按下表进行标准品浓度的依次稀释,获得不同浓度的多个磷标准。


    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    9

    10

    磷标准(10μg/ml/ml

    0.1

    0.2

    0.3

    0.4

    0.5

    0.6

    0.7

    0.8

    0.9

    1.0

    蒸馏水/ml

    0.9

    0.8

    0.7

    0.6

    0.5

    0.4

    0.3

    0.2

    0.1

    0

    磷含量/(μg/ml

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    9

    10

    2. 制备待测样液:取用粗AMP水解液或RNA水解液,作为待测样液。

    3. 磷测定:按下表进行操作,依次加入下列溶液,不能颠倒,每加一种试剂,必须充分混匀。如果样品中有无机磷,应同时检测无机磷,并将无机磷扣除。


    空白管

    标准管

    氧化管

    未氧化管

    蒸馏水

    1.0

    -

    0.5

    0.5

    系列磷标准(0-10号)/ml

    -

    0.5

    -

    -

    待测样液/ml

    -

    -

    0.5

    0.5

    过碘酸试剂/ml

    0.05

    0.05

    0.05

    0.05

    NA assay buffer/ml

    0.2

    0.2

    0.2

    0.2

    混匀,45℃孵育10min

    NA 显色液/ml

    0.25

    0.25

    0.25

    0.25

    混匀,孵育

    定磷试剂/ml

    1.5

    1.5

    1.5

    1.5

     

    4. 孵育,以空白管调零,比色杯光径1.0cm,分光光度计测定660nm处吸光度(即为A660),分别为A氧化A未氧化

     

    计算:

      以磷含量(μg/ml)为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得标准曲线。氧化管为样液中所有磷的含量,未氧化管为样液未氧化前无机磷的含量,二者只差即为样液中5′-核苷酸磷含量。

    按下列公式计算样液中5′-核苷酸的含量:
    5′-核苷酸含量(mg/ml=CM/31)×(N/1000

     

    注意事项:

    1. 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

    2. 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。

    3. 如果样品浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

     

    有效期:6个月有效。

     


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